Histonmethyltransferase-aktivitet associeret med et humant multiproteinkompleks


hodgkin

Histonmethyltransferase-aktivitet associeret med et humant multiproteinkompleks indeholdende Enhancer af Zeste-protein

Enhancer of Zeste [E (z)] er en transkriptionel repressor af Polycomb-gruppe og et af de grundlæggende medlemmer af familien af ​​SET-domæneholdige proteiner. Flere SET-domæne proteiner har indre histon methyltransferase (HMT) aktivitet.

Imidlertid viste det sig, at rekombinant E (z) -protein var inaktivt i et HMT-assay. Her rapporterer vi isoleringen af ​​et multiprotein E (z) -kompleks, der indeholder ekstra kønskamme, suppressor af zeste-12 [Su (z) 12] og de histonbindende proteiner RbAp46 / RbAp48.

Dette kompleks, som vi kaldte Polycomb repressivt kompleks (PRC) 2, besidder HMT-aktivitet med specificitet for Lys 9 (K9) og Lys 27 (Ok27) af histon H3. HMT-aktiviteten af ​​PRC2 er afhængig af et intakt SET-domæne i E (z) -proteinet. Vi antager, at transkriptionel undertrykkelse af E (z) proteinet involverer methyleringsafhængig rekruttering af PRC1. Tilstedeværelsen af ​​Su (z) 12, en stærk undertrykker af variation i positionseffekt, i PRC2 antyder, at PRC2 kan spille en udbredt rolle i heterochromatin-medieret lyddæmpning.

Histon methyltransferase aktivitet af et Drosophila Polycomb gruppe repressorkompleks

Polycomb group (PcG) proteiner opretholder transkriptionel undertrykkelse underneath udvikling, sandsynligvis ved at skabe undertrykkende kromatintilstande. Additional Intercourse Combs (ESC) og Enhancer of Zeste [E (Z)] proteiner er partnere i et essentielt PcG-kompleks, males dets fulde sammensætning og biokemiske aktiviteter er ikke kendt.

Et SET-domæne i E (Z) antyder, at dette kompleks måske methylerer histoner. Vi rensede et ESC-E (Z) -kompleks fra Drosophila-embryoner og fandt fireplace retailer underenheder: ESC, E (Z), NURF-55 og PcG-repressoren, SU (Z) 12. Et rekombinant kompleks rekonstitueret fra disse fireplace underenheder methylater lysin-27 af histon H3.

Mutationer i E (Z) SET-domænet forstyrrer methyltransferaseaktivitet in vitro og HOX-genundertrykkelse in vivo. Disse resultater identificerer E (Z) som et PcG-protein med enzymatisk aktivitet og implicerer histonmethylering i PcG-medieret lyddæmpning.

hodgkin

hodgkin

Intravenøse hMSC’er forbedrer myokardieinfarkt hos mus, fordi celler emboliseret i lunge aktiveres for at udskille det antiinflammatoriske protein TSG-6

 

Kvantitative analyser for humant DNA og mRNA blev brugt til at undersøge paradokset, som intravenøst ​​(i.v.) infunderede humane multipotente stromaceller (hMSC’er) kan forbedre vævsreparation uden signifikant indpodning. Efter 2 x 10 (6) blev hMSC’er i.v. infunderet i mus, blev de fleste af cellerne fanget som emboli i lungen.

Cellerne i lungen forsvandt med en halveringstid på ca. 24 timer, males <1000 celler dukkede op i seks andre væv. HMSC’erne i lungeopreguleret ekspression af flere gener med en stor stigning i det antiinflammatoriske protein TSG-6.

Efter hjerteinfarkt i.v. hMSC’er, males ikke hMSC’er transduceret med TSG-6 siRNA, nedsat inflammatoriske responser, reduceret infarktstørrelse og forbedret hjertefunktion. I.v. administration af rekombinant TSG-6 reducerede også inflammatoriske responser og reducerede infarktstørrelse. Resultaterne antyder, at forbedringer i dyremodeller og patienter efter i.v. infusioner af MSC’er forklares i det mindste delvist ved aktivering af MSC’er for at udskille TSG-6.

Amplifikation af et gen, der koder for et p53-associeret protein i humane sarkomer

På trods af omfattende information, der forbinder mutationer i p53-genet til human tumorigenese, vides der ikke meget om de cellulære regulatorer og mediatorer af p53-funktionen. MDM2 er en stærk kandidat til et sådant cellulært protein; MDM2-genet blev oprindeligt identificeret i kraft af dets amplifikation i et spontant transformeret derivat af BALB / c-muse-celler, og MDM2-proteinet blev efterfølgende vist at binde til p53 i rotte-celler transficeret med p53-gener. For at afgøre, om MDM2 spiller en rolle i human kræft, har vi klonet det humane MDM2-gen.

Her viser vi, at rekombinant-afledt humant MDM2-protein binder humant p53 in vitro, og vi bruger MDM2-kloner til at lokalisere det humane MDM2-gen til kromosom 12q13-14. Fordi denne kromosomale place synes at være ændret i mange sarkomer, så vi efter ændringer i human MDM2 i sådanne kræftformer.

Genet blev amplificeret i over en tredjedel af 47 sarkomer, inklusive almindelige former for knogler og blødt væv. Disse resultater er i overensstemmelse med hypotesen om, at MDM2 binder til p53, og at amplifikation af MDM2 i sarkomer fører til at flygte fra p53-reguleret vækstkontrol. Denne mekanisme af tumorigenese er parallel med viral-inducerede tumorer, hvor virale onkogenprodukter binder til og inaktiverer p53 funktionelt.

 

Identifikation af interferon-gamma som lymfokinet, der aktiverer human makrofag oxidativ metabolisme og antimikrobiel aktivitet

Mononukleære leukocytter fra humant blod stimuleret med toxoplasma-antigen, concanavalin A, mezerein plus linselektin eller stafylokok enterotoksin A udskilt en faktor (makrofagaktiverende faktor eller MAF), der forbedrede humane makrofagers kapacitet til at frigive H2O2 og dræbe toxoplasmaer.

De samme lymfoide supernatanter indeholdt IFN gamma, males ikke IFN alfa eller IFN beta. MAF-aktiviteten af ​​seks ud af syv ufraktionerede supernatanter blev fuldstændigt elimineret af et monoklonalt antistof, der neutraliserede IFN-gamma, og MAF i den resterende supernatant blev næsten fuldstændigt neutraliseret.

Indfødt IFN-gamma delvist oprenset ved to uafhængige protokoller til specifikke aktiviteter af 1 X 10 (6) og 10 (7) U / mg protein blev beriget i MAF-aktivitet mindst lige så meget som i antiviral aktivitet.

Makrofagernes kapacitet til at udskille H2O2 efter inkubation i delvist oprenset nativ IFN-gamma (gennemsnitlig topstimulering, 8,Eight gange) var større finish med ikke-oprensede lymfokiner (3,Eight gange) og til tider lig med eller overskredet kapaciteten for friskhøstede monocytter.

MAF-aktiviteten af ​​de delvist oprensede native IFN-gamma-præparater blev afskaffet med monoklonal anti-IFN-gamma. Endelig blev IFN-gamma med større finish 99% estimeret renhed isoleret (hos Genentech, Inc.) fra bakterier transformeret med det klonede humane gen til dette lymfokin.

Rekombinant IFN-gamma havde potent MAF-aktivitet, hvilket stimulerede makrofagers peroxidfrigivende kapacitet i gennemsnit 19,Eight gange ved peak respons og forbedrede deres evne til at dræbe toxoplasma fra 2,6 +/- 1,3% for ubehandlede celler til 54 +/- 0,4% for behandlede celler.

Opnåelse af 50% af den maksimale forhøjelse i peroxidfrigivelseskapacitet krævede en geometrisk gennemsnitskoncentration på 0,1 antiviralt U / ml rekombinant IFN-gamma, som estimeres til at være ca. 6 picomolar for dette præparat. Peroxidsekretorisk kapacitet og toxoplasmacid aktivitet af makrofager toppede 2-Four d efter eksponering for IFN gamma.

Peroxidsekretorisk kapacitet forblev forhøjet underneath mindst 6 d kontinuerlig eksponering, males effekten af ​​IFN-gamma blev vendt inden for ca. Three d efter fjernelse. Aktivering var normalt, males ikke altid ledsaget af karakteristiske ændringer i cellemorfologi.

Således aktiverer IFN gamma human makrofag oxidativ metabolisme og antimikrobiel aktivitet og syntes at være den eneste faktor, der konsekvent er i stand til at gøre det i de forskellige testede LK-præparater.

p27, en hidtil ukendt hæmmer af G1 cyclin-Cdk proteinkinaseaktivitet, er relateret til p21

Ved hjælp af en gærinteraktionsskærm til at søge efter proteiner, der interagerer med cyclin D1-Cdk4, identificerede vi et 27 kDa museprotein relateret til p21 cyclin-Cdk-hæmmeren. p27 interagerer stærkt med D-typen cycliner og Cdk4 in vitro og mere svagt med cyclin E og Cdk2. I musefibroblaster er p27 overvejende forbundet med cyclin D1-Cdk4.

Rekombinant p27 er en potent hæmmer af cyclin D1-Cdk4 og cyclin A-Cdk2 proteinkinaseaktivitet og en svagere hæmmer af cyclin B1-Cdc2. Overekspression af p27 i Saos-2-celler forårsager G1-anholdelse. p27-proteinniveauer ændres ikke, når serumstimulerede hvilende musefibroblaster udvikler sig gennem cellecyklussen. p27 er identisk med p27Kip1, en cyclin-Cdk-hæmmer til stede i TGF-beta-behandlede celler. p27 har kendetegnene for en negativ regulator for G1-progression og kan formidle TGF beta-induceret G1-anholdelse.

 

Kloning af et nyt cytokin, der inducerer IFN-gamma-produktion af T-celler

Mekanismen bag differentieringen af ​​CD4 + T-celler i funktionelt forskellige undergrupper (Th1 og Th2) forstås ufuldstændigt, og hidtil kan det være nødvendigt med uidentificerede cytokiner til den funktionelle modning af disse celler. Her rapporterer vi kloning af en for nylig identificeret IFN-gamma-inducerende faktor (IGIF), der forøger naturlig dræberaktivitet (NK) -aktivitet i miltceller.

Genet koder for et forløberprotein på 192 aminosyrer og et modent protein på 157 aminosyrer, som ikke har nogen åbenlyse ligheder med noget peptid i databaserne. Messenger-RNA’er til IGIF og interleukin-12 (IL-12) detekteres let i Kupffer-celler og aktiverede makrofager.

Rekombinant IGIF inducerer IFN-gamma mere potent finish IL-12, tilsyneladende gennem en separat vej. Administration af anti-IGIF-antistoffer forhindrer leverskader hos mus podet med Propionibacterium acnes og udfordret med lipopolysaccharid, hvilket inducerer toksisk shock. IGIF kan være involveret i udviklingen af ​​Th1-celler og også i mekanismer for vævsskade i inflammatoriske reaktioner.

Leave a Reply

Your email address will not be published. Required fields are marked *