BMP-7 modvirker TGF-beta1-induceret epitel-til-mesenkym overgang og vender kronisk nyreskade
Knoglemorfogent protein (BMP) -7 er et 35-kDa homodimert protein og et medlem af den transformerende vækstfaktor (TGF) -beta-superfamilie. BMP-7-ekspression er højest i nyrerne, og dens genetiske sletning hos mus fører til alvorlig svækkelse af øjen-, skelet- og nyreudvikling. Her rapporterer vi, at BMP-7 vender TGF-beta1-induceret epitel-til-mesenkym overgang (EMT) ved reinduktion af E-cadherin, et nøgleepitelcelleadhæsionsmolekyle.
Derudover tilvejebringer vi molekylær dokumentation for Smad-afhængig reversering af TGF-beta1-induceret EMT af BMP-7 i nyre, rørformede epitelceller og brystductale epitelceller. I nyrerne betragtes EMT-induceret ophobning af myofibroblaster og efterfølgende rørformet atrofi som nøglebestemmere for nyrefibrose below kronisk nyreskade.
Vi testede derfor potentialet for BMP-7 til at vende TGF-beta1-induceret de novo EMT i en musemodel af kronisk nyreskade. Vores resultater viser, at systemisk indgivelse af rekombinant humant BMP-7 fører til reparation af alvorligt beskadigede nyre, rørformede epitelceller i forbindelse med reversering af kronisk nyreskade. Samlet set giver disse resultater bevis for krydstale mellem BMP-7 og TGF-beta1 i reguleringen af EMT i sundhed og sygdom.
M-type phospholipase A2-receptor som målantigen i idiopatisk membranøs nefropati
BAGGRUND
Idiopatisk membranøs nefropati, en almindelig type for nefrotisk syndrom, er en antistof-medieret autoimmun glomerulær sygdom. Serologisk diagnose har været undvigende, fordi målantigenet er ukendt.
METODER
Vi udførte Western blotting af proteinekstrakter fra normale humane glomeruli med serumprøver fra patienter med idiopatisk eller sekundær membranøs nefropati eller andre proteinuriske eller autoimmune sygdomme og fra normale kontroller. Vi brugte massespektrometri til at analysere de reaktive proteinbånd og bekræftede identiteten og placeringen af målantigenet med et monospecifikt antistof.
RESULTATER
Serumprøver fra 26 ud af 37 patienter (70%) med idiopatisk, males ikke sekundær membranøs nefropati, identificerede specifikt et 185 kD glykoprotein i ikke-reduceret glomerulært ekstrakt. Massespektrometri af det reaktive proteinbånd påviste M-type phospholipase A (2) -receptor (PLA (2) R). Reaktive serumprøver genkendte rekombinant PLA (2) R og bundet det samme glomerulære protein på 185 kD som det monospecifikke anti-PLA (2) R-antistof. Anti-PLA (2) R-autoantistoffer i serumprøver fra patienter med membranøs nefropati var hovedsageligt IgG4, den dominerende immunglobulinunderklasse i glomerulære aflejringer. PLA (2) R blev udtrykt i podocytter i normale humane glomeruli og colokaliseret med IgG4 i immunaflejringer i glomeruli hos patienter med membranøs nefropati. IgG elueret fra sådanne aflejringer hos patienter med idiopatisk membranøs nefropati, males ikke hos patienter med lupus membranøs eller IgA nefropati, anerkendt PLA (2) R.
KONKLUSIONER
Et flertal af patienter med idiopatisk membranøs nefropati har antistoffer mod en konformationsafhængig epitop i PLA (2) R. PLA (2) R er til stede i normale podocytter og i immunaflejringer hos patienter med idiopatisk membranøs nefropati, hvilket indikerer, at PLA (2) R er et væsentligt antigen i denne sygdom.
En hidtil ukendt angiotensin-konverterende enzym-relateret carboxypeptidase (ACE2) konverterer angiotensin I til angiotensin 1-9
ACE2, den første kendte humane homolog af angiotensin-konverterende enzym (ACE), blev identificeret fra 5′-sekventering af et humant hjertesvigt ventrikel cDNA-bibliotek. ACE2 har et tilsyneladende signalpeptid, et enkelt metalloprotease-aktivt sted og et transmembrandomæne. De metalloproteasekatalytiske domæner af ACE2 og ACE er 42% identiske, og sammenligning af de genomiske strukturer indikerer, at de to gener opstod gennem duplikering.
I modsætning til den mere allestedsnærværende ACE findes ACE2-udskrifter kun i hjerte, nyre og testikler fra 23 undersøgte humane væv. Immunhistokemi viser ACE2-protein overvejende i endotel i koronar og intrarenale kar og i renalt tubulært epitel. Aktivt ACE2-enzym udskilles fra transficerede celler ved spaltning af N-terminal til transmembrandomænet. Rekombinant ACE2 hydrolyserer den carboxyterminale leucin fra angiotensin I til dannelse af angiotensin 1-9, der omdannes til mindre angiotensinpeptider af ACE in vitro og af kardiomyocytter i kultur.
ACE2 kan også spalte des-Arg-bradykinin og neurotensin, males ikke bradykinin eller 15 andre vasoaktive og hormonelle peptider, der er testet. ACE2 hæmmes ikke af lisinopril eller captopril. Den organ- og celle-specifikke ekspression af ACE2 og dens unikke spaltning af centrale vasoaktive peptider antyder en vigtig rolle for ACE2 i det lokale renin-angiotensinsystem i hjertet og nyrerne. Den fulde tekst i denne artikel er tilgængelig på http: // www. circresaha.org.
Identifikation af et nyt humant coronavirus
Der vides at eksistere tre humane coronavirus: humant coronavirus 229E (HCoV-229E), HCoV-OC43 og svær akut respiratorisk syndrom (SARS) -associeret coronavirus (SARS-CoV). Her rapporterer vi identifikationen af et fjerde humant coronavirus, HCoV-NL63, ved hjælp af en ny metode til virusopdagelse. Virussen blev isoleret fra et 7 måneder gammelt barn, der led af bronchiolitis og conjunctivitis. Den komplette genom-sekvens indikerer, at denne virus ikke er en rekombinant, males snarere en ny gruppe 1-coronavirus.
In vitro-værtscelleområdet for HCoV-NL63 er bemærkelsesværdigt, fordi det replikerer på tertiære abenyreceller og abenyren LLC-MK2-cellelinien. Viralgenomet indeholder særpræg, herunder et unikt N-terminalt fragment inden i spike-proteinet. Screening af kliniske prøver fra personer, der lider af luftvejssygdomme, identificerede syv yderligere HCoV-NL63-inficerede individer, hvilket indikerer, at virussen var bredt spredt inden for den menneskelige befolkning.
Molekylær kloning og ekspression af Fas-liganden, et nyt medlem af tumornekrosefaktorfamilien
Fas-antigenet (Fas) hører til tumornekrosefaktoren (TNF) / nervevækstfaktorreceptorfamilien, og det medierer apoptose. Ved anvendelse af en opløselig type af muse-Fas, fremstillet ved fusion med humant immunglobulin Fc, blev Fas-ligand påvist på celleoverfladen af et cytotoksisk T-cellehybridom, PC60-d10S. En cellepopulation, der meget udtrykker Fas-ligand, blev sorteret below anvendelse af en fluorescensaktiveret cellesorterer, og dens cDNA blev isoleret fra de sorterede celler ved ekspressionskloning.
Aminosyresekvensen indikerede, at Fas-ligand er et sort II transmembranprotein, der hører til TNF-familien. Den rekombinante Fas-ligand udtrykt i COS-celler inducerede apoptose i Fas-udtrykkende målceller. Nordlig hybridisering afslørede, at Fas-ligand udtrykkes i aktiverede splenocytter og thymocytter, i overensstemmelse med dets involvering i T-celle-medieret cytotoksicitet og i flere ikke-lymfoidvæv, såsom testikler.
Selektiv inhibering af proteinkinase C-isozymer af indolocarbazol Gö 6976 ????
Indolocarbazoler er blevet identificeret som hidtil ukendte hæmmere af proteinkinase C (PKC), med Gö 6976 som en af dens mest potente og selektive repræsentanter. Rekombinante PKC-isozymer alfa, beta 1, delta, epsilon og zeta blev anvendt i in vitro kinaseassays til at undersøge Gö 6976 med hensyn til isozym-specifik PKC-hæmning. Gö 6850, identisk med GF 109203X, en anden PKC-specifik kinaseinhibitor, blev inkluderet i denne undersøgelse som en referenceforbindelse.
Nanomolære koncentrationer af indolocarbazol Gö 6976 inhiberede Ca (2 +) – afhængige isozymer alfa og beta 1, hvorimod selv mikromolær koncentration af Gö 6976 ikke havde nogen effekt på kinaseaktiviteten af Ca (2 +) – uafhængige PKC-undertyper delta, epsilon og zeta. I modsætning hertil hæmmede bisindolymaleimid Gö 6850 alle PKC-isozymer canine med en rangeret rækkefølge af styrke (alfa >> beta 1 >> epsilon >> delta >> zeta).
Kinetisk analyse afslørede, at PKC-inhibering fra Gö 6976 var konkurrencedygtig med hensyn til ATP, ikke-konkurrencedygtig med hensyn til proteinsubstratet og blandet sort med hensyn til phosphatidylserin. Yderligere eksperimenter i nærvær af forskellige mængder frit Ca2 + viste, at interferens med Ca2 + eller dets bindingssted ikke er ansvarlig for den differentielle inhibering af PKC-isozymer ved Gö 6976.
Hypercholesterolæmi i lipoproteinreceptor knockout-mus med lav densitet og dets reversering ved adenovirus-medieret genlevering
Vi anvendte homolog rekombination i embryonale stamceller til at producere mus, der manglede funktionelle LDL-receptorgener. Homozygote han- og hunmus, der manglede LDL-receptorer (LDLR – / – mus), var levedygtige og frugtbare. De samlede plasmakolesterolniveauer var dobbelt så høje som for vildtypekuldkammerater på grund af en syv til ni gange stigning i mellemdensitetslipoproteiner (IDL) og LDL uden en signifikant ændring i HDL.
Plasma triglyceridniveauer var normale. Halveringstiden for intravenøst administreret 125I-VLDL og 125I-LDL blev forlænget med henholdsvis 30 gange og 2,5 gange, males clearance af 125I-HDL var regular i LDLR – / – musene. I modsætning til vildtypemus reagerede LDLR – / – mus på reasonable mængder diætkolesterol (0,2% kolesterol / 10% kokosolie) med en betydelig stigning i kolesterolindholdet i IDL og LDL-partikler.
Det forhøjede IDL / LDL-niveau af LDLR – / – mus blev reduceret til normalt four d efter den intravenøse injektion af et rekombinant replikationsdefekt adenovirus, der koder for den humane LDL-receptor drevet af cytomegaloviruspromotoren.
Virussen gendannede ekspression af LDL-receptorprotein i leveren og øgede clearance af 125I-VLDL. Vi konkluderer, at LDL-receptoren til dels er ansvarlig for de lave niveauer af VLDL, IDL og LDL i vildtypemus, og at adenovirus-kodede LDL-receptorer akut kan vende de hyperkolesterolæmiske virkninger af LDL-receptormangel.
