Bcl-2 familieproteiner regulerer frigivelsen af apoptogen cytochrom c af den mitokondrie kanal VDAC
Underneath transduktion af et apoptotisk (død) sign i cellen er der en ændring i permeabiliteten af membranerne i cellens mitokondrier, hvilket forårsager translokation af det apoptogene protein cytochrom c i cytoplasmaet, hvilket igen aktiverer dødsstyrende proteolytisk proteiner kendt som caspaser.
Bcl-2-familien af proteiner, hvis medlemmer kan være anti-apoptotiske eller pro-apoptotiske, regulerer celledød ved at kontrollere denne mitokondrie-membranpermeabilitet underneath apoptose, males hvordan dette opnås er uklart. Her skaber vi liposomer, der bærer den mitokondrie porinkanal (også kaldet den spændingsafhængige anionkanal eller VDAC) for at vise, at de rekombinante pro-apoptotiske proteiner Bax og Bak fremskynder åbningen af VDAC, hvorimod det anti-apoptotiske protein Bcl-x (L) lukker VDAC ved direkte at binde til det. Bax og Bak tillader cytochrom c at passere gennem VDAC ud af liposomer, males passage forhindres af Bcl-x (L).
I overensstemmelse med dette udviste VDAC1-mangelfuld mitokondrier fra en mutant gær ikke et Bax / Bak-induceret tab i membranpotentiale og frigivelse af cytochrom c, som begge blev hæmmet af Bcl-x (L). Vores resultater indikerer, at Bcl-2-familien af proteiner binder til VDAC for at regulere mitokondrie-membranpotentialet og frigivelsen af cytochrom c underneath apoptose.
Dannelse af bovint respiratorisk syncytialvirus (BRSV) fra cDNA: BRSV NS2 er ikke essentielt for virusreplikation i vævskultur, og den humane RSV-lederregion fungerer som en funktionel BRSV-genompromotor
For at generere rekombinant bovint respiratorisk syncytialvirus (BRSV) blev genomet af BRSV-stamme A51908, variant ATue51908, klonet som cDNA. Vi tilvejebringer her sekvensen af BRSV-genomet ender og af hele L-genet. Dette fuldender sekvensen af BRSV-genomet, som omfatter i alt 15.140 nukleotider.
For at etablere et vaccinia-virusfrit genvindingssystem blev der genereret en BHK-afledt cellelinie, der stabilt udtrykker T7 RNA-polymerase (BSR T7 / 5). Rekombinant BRSV blev reproducerbart genvundet fra cDNA-konstruktioner efter T7-RNA-polymerasedrevet ekspression af antigenomsense-RNA og af BRSV N-, P-, M2- og L-proteiner fra transficerede plasmider.
Kimære vira, hvor BRSV-lederregionen blev erstattet af den humane respiratoriske syncytialvirus (HRSV) lederregion replikeret i cellekultur lige så effektivt som deres ikke-kimære modstykker, hvilket viser, at alle cis-virkende sekvenser af HRSV-promotoren trofast genkendes af BRSV-polymerasen kompleks.
Derudover rapporterer vi den vellykkede genopretning af en BRSV-mutant, der mangler det komplette NS2-gen, som koder for et ikke-strukturelt protein med ukendt funktion.
Den NS2-mangelfulde BRSV replikerede autonomt og kunne passeres, hvilket viser, at NS2 ikke er essentiel for virusreplikation i cellekultur. Væksten af mutanten var imidlertid betydeligt langsommere finish, og endelige infektiøse titere blev reduceret med en faktor på mindst 10 sammenlignet med vildtype BRSV, hvilket indikerer, at NS2 tilvejebringer en understøttende faktor, der kræves for fuld replikationskapacitet.
Gær Gcn5 fungerer i to multisubunit-komplekser til acetylering af nukleosomale histoner: karakterisering af et Ada-kompleks og SAGA (Spt / Ada) -komplekset
Det transkriptionelle adapterprotein Gcn5 er blevet identificeret som en nuklear histonacetyltransferase (HAT). Selvom rekombinant gær Gcn5 effektivt acetylerer frie histoner, undlader det ikke at acetylere histoner indeholdt i nukleosomer, hvilket indikerer, at der kræves yderligere komponenter til acetylering af kromosomale histoner. Vi rapporterer her, at Gcn5 fungerer som en katalytisk underenhed i to native HAT-komplekser med høj molekylvægt med tilsyneladende molekylmasser på henholdsvis 0,Eight og 1,Eight megadalton (MD), som acetylerer nukleosomale histoner.
Både de 0,8- og 1,8-MD Gcn5-holdige komplekser co-fraktionerer med Ada2 og går tabt i gcn5delta-, ada2delta- eller ada3delta-gærstammer, hvilket illustrerer, at disse HAT-komplekser er oprigtige native Ada-transkriptionelle adapterkomplekser.
Det er vigtigt, at 1,8-MD-adapteren / HAT-komplekset også indeholder Spt-genprodukter, der er knyttet til TATA-bindende protein (TBP) -funktion. Dette kompleks går tabt i spt20 / ada5delta- og spt7delta-stammer og Spt3, Spt7, Spt20 / Ada5, Ada2 og Gcn5 copurifieres alle med dette nukleosomale HAT-kompleks. Derfor illustrerer 1,8-MD adapter / HAT-komplekset en interaktion mellem Ada- og Spt-genprodukter og bekræfter eksistensen af et kompleks indeholdende TBP-gruppen af Spt-proteiner som demonstreret ved genetiske og biokemiske undersøgelser.
Vi har navngivet denne nye transkriptionsregulerende kompleks SAGA (Spt-Ada-Gcn5-Acetyltransferase). Funktionen af Gcn5 som en histonacetyltransferase inden for Ada- og SAGA-adapterkomplekserne indikerer vigtigheden af histonacetylering underneath trin i transkriptionsaktivering medieret af interaktioner med transkriptionsaktivatorer og generelle transkriptionsfaktorer (dvs. TBP).
HLA-E binder til naturlige dræbercellereceptorer CD94 / NKG2A, B og C
Proteinet HLA-E er et ikke-klassisk molekyle med større histokompatibilitetskompleks (MHC) med begrænset sekvensvariabilitet. Dets ekspression på celleoverfladen reguleres af bindingen af peptider afledt af signalsekvensen for nogle andre MHC klasse I-molekyler.
Her rapporterer vi identifikationen af ligander til HLA-E. Vi konstruerede tetramerer, hvor rekombinant HLA-E og beta2-mikroglobulin blev foldet op igen med et MHC-ledersekvenspeptid, biotinyleret og konjugeret til phycoerythrin-mærket Extravidin. Denne HLA-E-tetramer bundet til naturlige dræberceller (NK) -celler og en lille delmængde af T-celler fra perifert blod.
På transfektanter bundet tetrameren til CD94 / NKG2A, CD94 / NKGK2B og CD94 / NKG2C NK-cellereceptorer, males bundet ikke til immunoglobulinfamilien af NK-cellereceptorer (KIR). Overfladeekspression af HLA-E var tilstrækkelig til at beskytte målceller mod lysis ved hjælp af CD94 / NKG2A + NK-cellekloner.
En delmængde af HLA klasse I-alleler har vist sig at hæmme drab af CD94 / NKG2A + NK-cellekloner. Kun HLA-alleler, der har et lederpeptid, der er i stand til at opregulere HLA-E-overfladeekspression, giver resistens over for NK-celle-medieret lysis, hvilket antyder, at deres virkning medieres af HLA-E, den dominerende ligand for den NK-celleinhiberende receptor CD94 / NKG2A .
Interferoner, interferonlignende cytokiner og deres receptorer
Rekombinant interferon-alfa (IFN-alfa) blev godkendt af regulerende organer i mange lande i 1986. Som den første bioterapeutiske godkendte banede IFN-alfa vejen for udvikling af mange andre cytokiner og vækstfaktorer. Ikke desto mindre har forståelse af funktionerne i en lang række menneskelige IFN’er og IFN-lignende cytokiner netop rørt overfladen.
Denne gennemgang opsummerer historien om oprensning af humane IFN’er og de vigtigste aspekter af vores nuværende viden om humane IFN-gener, proteiner og receptorer. Alle kendte IFN’er og IFN-lignende cytokiner er beskrevet [IFN-alfa, IFN-beta, IFN-epsilon, IFN-kappa, IFN-omega, IFN-delta, IFN-tau, IFN-gamma, limitin, interleukin-28A ( IL-28A), IL-28B og IL-29] såvel som deres receptorer og signaltransduktionsveje.
Proteinernes biologiske aktiviteter og kliniske anvendelser diskuteres. Et omfattende afsnit om udviklingen af disse molekyler giver nogle nye indsigter i udviklingen af disse proteiner som vigtige elementer i medfødt immunitet. IFN’ernes samlede struktur sættes i perspektiv i forhold til deres receptorer og funktioner.
